9. Centrifuge berpendingin
Centrifuge berpendingin dengan kisaran suhu -20 ° C hingga -30 ° C. Centrifuge tersedia dalam berbagai model dan dilengkapi sistem kontrol suhu, yang penting untuk banyak keperluan yang memerlukan suhu lebih rendah serta dudukan rotor dan tabung sampel. Sentrifugal ini memiliki rentang kecepatan hingga 60.000 dan ideal untuk memisahkan berbagai biomolekul. Ini juga digunakan untuk mengumpulkan sel-sel yang membelah dengan cepat seperti ragi, kloroplas, dan sel darah merah.
Teknik sentrifugasi
Tergantung pada tujuan penggunaan, sentrifugasi dapat dibagi menjadi dua jenis: sentrifugasi preparatif dan analitis. (Preparatif hanya untuk pemisahan skala preparatif dan dalam sentrifugasi analitik, analisis parameter tertentu dilakukan.)
Teknik sentrifugasi preparatif
Ini berfokus pada isolasi aktual, pemurnian, dan pemisahan virus, polisom, lipoprotein, ribosom, membran plasma, dan asam nukleat. Setelah sentrifugasi, rotor harus dihentikan, dan gradien masing-masing tabung secara bertahap diumpankan untuk mengisolasi setiap komponen individu. Setelah setiap lari, tidak ada pembacaan visual yang tersedia untuk pemeriksaan. Pemisahan molekul dan organel berdasarkan laju sedimentasi.
Jenis sentrifugasi preparatif:
Sentrifugasi diferensial
Teknik ini, yang didasarkan pada variasi laju sedimentasi partikel dengan berbagai ukuran dan kepadatan, digunakan untuk mengisolasi organel tertentu. Dengan meningkatkan medan sentrifugal yang diterapkan, bahan yang akan dipisahkan dibagi secara sentrifugal menjadi beberapa fraksi. Medan sentrifugal setiap tahap dipilih untuk memungkinkan jenis bahan tertentu mengendap dalam periode sentrifugasi yang telah ditentukan, menghasilkan pelet partikel dan supernatan. Sentrifugasi tunggal tidak dapat menghasilkan pelet partikel terberat. Mayoritas material yang sedimen perlahan tinggal di supernatan. Dalam buffer, larutan sampel dihomogenisasi. Setelah itu, sampel dimasukkan ke dalam tabung centrifuge dan dioperasikan untuk jangka waktu tertentu pada suhu dan gaya sentrifugal yang telah ditentukan. Endapan yang terpisah dari supernatan akan terbentuk di bagian bawah tabung pada akhir operasi ini. Setelah menambahkan supernatan ke tabung centrifuge segar, centrifuge untuk jumlah waktu dan suhu yang ditentukan pada kecepatan yang berbeda. Pelet dan supernatan dipisahkan. Sampai semua komponen terpisah, terus lakukan prosedur ini.
Sentrifugasi gradien densitas
Sentrifugasi adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan partikel biologis dengan ukuran yang sama tetapi kepadatan yang berbeda. Dasar pemisahan adalah kerapatan molekul saat bergerak melintasi gradien kerapatan saat didorong oleh gaya sentrifugal. Metode pemisahan ini memanfaatkan berbagai media, seperti silika, polisakarida, dan garam anorganik. Metode ini menggunakan bahan yang memiliki gradien dalam kepadatan, di mana kepadatan harus dinaikkan atau diturunkan. Gaya sentrifugal dihasilkan saat sampel berputar karena molekul dalam sampel bergerak melalui medium. Molekul yang lebih padat mulai turun saat melewati gradien densitas. Pada titik tertentu, kepadatan partikel cocok dengan media sekitarnya, dan molekul menjadi tersuspensi. Ada dua jenis sentrifugasi gradien densitas, teknik zonal laju dan teknik isopsiknik.
Nilai teknik zona
Metode ini diterapkan pada pemisahan hormon, subunit ribosom, dan enzim. Perbedaan ukuran partikel, bentuk, dan kepadatan, viskositas dan densitas sedang, dan medan sentrifugal yang diterapkan semuanya mempengaruhi pemisahan. Dengan menggunakan metode ini, larutan sampel harus diposisikan dengan benar di bagian atas gradien densitas cairan. yang kepadatan terbesarnya tidak lebih dari partikel terpadat yang perlu dipisahkan. Tujuan dari gradien adalah untuk memberikan gradien viskositas yang membantu dalam meningkatkan resolusi gradien dan menstabilkan kolom cairan dalam tabung terhadap gerakan yang disebabkan oleh arus konvensional. Setelah itu, sampel disentrifugasi untuk jangka waktu yang cukup lama untuk memungkinkan partikel melintasi gradien dan membentuk zona yang berbeda.
Sentrifugasi isopiknik
Metode ini tidak tergantung pada waktu dan bergantung pada kepadatan apung partikel daripada ukuran atau bentuknya. Ini dapat memisahkan organel subseluler tetapi tidak larut protein dengan kepadatan yang sama karena dirancang untuk memisahkan partikel dengan ukuran identik tetapi kepadatan yang berbeda. Di atas gradien densitas adalah tempat sampel diposisikan. Sentrifugasi menyebabkan sedimentasi sampai gradien partikel dan kepadatan apung sama. Pada titik isodensitas, tidak ada sedimentasi lebih lanjut. Metode ini melibatkan penggunaan sukrosa, silika, dan garam logam berat (cesium). CsCl dikombinasikan dengan sampel. Sedimen molekul CsCl ketika larutan CsCl disentrifugasi, menciptakan gradien konsentrasi dan kemudian gradien kepadatan. Molekul sampel tersebar merata di seluruh tabung, dan ketika mereka sampai di tempat di mana kepadatan larutan cocok dengan kepadatan apung mereka sendiri, mereka bergabung bersama untuk menciptakan zona.
Sentrifugasi analitik
Ini digunakan untuk memisahkan makromolekul murni, dengan gaya sentrifugal dan densitas berfungsi sebagai dasar pemisahan. Mereka menggunakan rotor dan detektor yang dibuat khusus untuk terus memantau proses sedimentasi bahan, memungkinkan untuk mempelajari massa molekul relatif dan bentuk zat dengan persyaratan bahan minimal. Tiga sistem optik fluoresensi, reflektansi, dan absorbansi termasuk dalam ultrasentrifugal analitik untuk memberikan pemeriksaan sedimentasi yang cepat, akurat, dan terfokus. Sampel kecil (20-120 mm3) harus ditempatkan dalam sel analitik dan kemudian ke ultracentrifuge. Setelah menyalakan ultracentrifuge, biomolekul yang tersebar secara acak mulai bergerak secara radial keluar dari pusat rotasi karena gaya sentrifugal.
