Daftar Isi
- Pendahuluan dan Tujuan Prosedur
- Ruang Lingkup Aplikasi SOP
- Tugas dan Tanggung Jawab Personel
- Akuntabilitas Manajemen
- Definisi Istilah dan Terminologi
- Persyaratan Umum Pelaksanaan Validasi
- Pemilihan dan Preparasi Sampel serta Standar
- Spesifisitas dan Selektivitas Metode
- Batasan Deteksi dan Batasan Kuantitasi
- Linearitas dan Jangkauan Kerja Metode
- Presisi dan Reproduktibilitas
- Akurasi dan Ketepatan Metode
- Stabilitas Larutan dan Standarisasi
- Verifikasi Metode Kompendial
- Validasi Metode Pengembangan Internal
- Dokumentasi dan Pelaporan Hasil
- Lampiran dan Referensi
1. Pendahuluan dan Tujuan Prosedur
Prosedur Standar Operasional Prosedur (SOP) ini dirancang dan disusun untuk menetapkan langkah-langkah sistematis dalam melakukan validasi maupun verifikasi metode analitik di Departemen Kontrol Kualitas (Quality Control/QC). Tujuan utama dari implementasi prosedur ini adalah untuk memastikan bahwa seluruh metode analitik yang diterapkan di laboratorium telah teruji keandalannya, memenuhi kriteria penerimaan yang telah ditetapkan, serta sesuai dengan persyaratan regulasi yang berlaku di industri farmasi.
Validasi metode analitik memegang peranan sangat penting dalam sistem jaminan mutu laboratorium. Melalui proses validasi yang komprehensif, laboratorium dapat memberikan kepastian bahwa data hasil pengujian yang dihasilkan bersifat akurat, presisi, spesifik, dan dapat dipercaya. Data yang valid menjadi dasar pengambilan keputusan kritis terkait pelepasan produk obat, penentuan batas spesifikasi, serta kepatuhan terhadap persyaratan regulasi dari badan-badan pengawas seperti Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM), United States Food and Drug Administration (FDA), European Medicines Agency (EMA), serta berbagai badan regulasi internasional lainnya.
Prosedur ini mengacu pada pedoman teknis yang dikeluarkan oleh International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use (ICH) khususnya guideline Q2(R1) mengenai validasi metode analitik, serta pedoman farmakope internasional seperti United States Pharmacopeia (USP) General Chapter <1225> mengenai validasi prosedur analitik dan USP <1226> mengenai verifikasi prosedur analitik kompendial.
2. Ruang Lingkup Aplikasi SOP
SOP ini berlaku dan diterapkan secara menyeluruh untuk seluruh aktivitas validasi maupun verifikasi metode analitik yang dilaksanakan di Departemen Quality Control. Ruang lingkup aplikasi prosedur ini mencakup berbagai jenis materi uji yang berbeda, antara lain produk obat jadi, bahan obat, serta metode analitik yang bersumber dari farmakope maupun metode yang dikembangkan secara internal oleh laboratorium.
Rincian ruang lingkup aplikasi SOP ini meliputi beberapa kategori penting sebagai berikut: pertama, produk obat jadi mencakup pengujian parameter seperti kadar atau assay, pemeriksaan zat-zat pengotor atau related substances, keseragaman kandungan atau content uniformity, serta pengujian bahan pengawet atau preservative content. Kedua, bahan obat atau drug substances mencakup pengujian kadar atau assay untuk memastikan kemurnian dan kekuatan bahan obat. Ketiga, metode analitik kompendial adalah metode yang telah tercantum dalam farmakope resmi seperti Farmakope Indonesia, USP, Ph. Eur., atau farmakope resmi negara lain yang diakui. Keempat, metode analitik pengembangan internal adalah metode yang dirumuskan dan dikembangkan sendiri oleh laboratorium untuk memenuhi kebutuhan pengujian khusus yang tidak tercakup dalam metode kompendial.
3. Tugas dan Tanggung Jawab Personel
Dalam pelaksanaan prosedur validasi dan verifikasi metode analitik, terdapat pembagian tugas dan tanggung jawab yang jelas antara berbagai jenjang jabatan di Departemen Quality Control. Pemetaan tanggung jawab ini dirancang untuk memastikan adanya akuntabilitas yang transparan dan pengawasan yang efektif di setiap tahapan pelaksanaan.
Personel dengan jenjang Officer ke atas bertanggung jawab dalam beberapa aktivitas operasional penting. Pertama, mereka bertugas menyiapkan dan menyusun naskah prosedur atau SOP validasi metode analitik. Kedua, personel ini mengalokasikan dan memberikan nomor Analytical Report (AR) sebagai identitas dokumentasi untuk setiap studi validasi atau verifikasi yang dilaksanakan. Ketiga, mereka melaksanakan studi validasi maupun verifikasi secara langsung sesuai dengan protokol yang telah disetujui, termasuk persiapan sampel, operasi instrumen, pengumpulan data, dan perhitungan hasil.
Personel dengan jenjang Executive ke atas memiliki tanggung jawab dalam hal review dan pengecekan. Mereka bertugas menelaah dan memeriksa naskah SOP serta seluruh dokumen validasi yang telah disusun oleh personel di bawahnya. Review ini mencakup pengecekan kelengkapan, ketepatan prosedur, kesesuaian dengan pedoman regulasi, serta konsistensi dokumentasi. Setelah melalui proses review, dokumen akan diteruskan untuk tahap persetujuan akhir.
Head atau Kepala Departemen Quality Assurance dan Quality Control memiliki tanggung jawab final dalam hal persetujuan prosedur. Persetujuan ini diberikan setelah seluruh dokumen validasi melalui proses review yang komprehensif dan telah memenuhi semua persyaratan yang ditetapkan.
4. Akuntabilitas Manajemen
Kepala Departemen Quality Control bertanggung jawab penuh atas implementasi dan kepatuhan terhadap prosedur validasi metode analitik yang ditetapkan dalam SOP ini. Akuntabilitas ini mencakup memastikan bahwa seluruh aktivitas validasi dilakukan sesuai dengan rencana kerja, bahwa standar operasional yang berlaku dipatuhi oleh seluruh personel, serta bahwa dokumentasi hasil validasi tersimpan dengan baik dan dapat ditelusuri.
5. Definisi Istilah dan Terminologi
Validasi metode analitik didefinisikan sebagai proses demonstrasi ilmiah yang sistematis untuk membuktikan bahwa sebuah metode analitik tertentu telah terbukti cocok dan layak untuk tujuan penggunaannya. Definisi ini menekankan bahwa validasi bukan sekadar pengisian formulir, melainkan proses bukti ilmiah yang komprehensif.
Verifikasi metode analitik merupakan proses konfirmasi bahwa metode kompendial yang telah divalidasi oleh otoritas regulasi dan tercantum dalam farmakope resmi dapat bekerja dengan baik dan menghasilkan hasil yang memadai ketika diterapkan dalam kondisi laboratorium actual. Verifikasi berbeda dengan validasi penuh karena skala dan kedalaman pengujian yang dilakukan lebih terbatas.
Spesifisitas atau selektivitas didefinisikan sebagai kemampuan metode analitik untuk mengukur analyte target secara tegas dan tidak ambigu di tengah keberadaan komponen lain yang mungkin terdapat dalam matriks sampel, termasuk zat pengotor atau impurities, produk degradasi atau degradants, serta eksipien atau bahan tambahan obat.
Batasan Deteksi atau Limit of Detection (LOD) merupakan jumlah atau konsentrasi terkecil dari analyte yang dapat dideteksi oleh metode analitik, namun belum tentu dapat diukur atau dikuantifikasi secara kuantitatif dengan tingkat presisi dan akurasi yang memadai.
Batasan Kuantitasi atau Limit of Quantitation (LOQ) merupakan jumlah atau konsentrasi terkecil dari analyte yang dapat diukur dengan tingkat akurasi dan presisi yang masih dapat diterima sesuai dengan kriteria penerimaan yang ditetapkan.
Linearitas adalah kemampuan metode analitik untuk menghasilkan hasil pengujian yang secara langsung berbanding lurus atau proporsional terhadap konsentrasi analyte di dalam sampel, sepanjang konsentrasi tersebut berada dalam jangkauan metode yang telah divalidasi.
Jangkauan atau range didefinisikan sebagai interval konsentrasi antara batas atas dan batas bawah di mana akurasi, presisi, dan linearitas metode telah terbukti dan terdemonstrasikan dengan baik melalui data validasi.
Presisi menggambarkan tingkat keseragaman atau kedekatan agreement antara beberapa hasil pengukuran yang dilakukan secara berulang pada sampel yang homogen sama. Presisi dievaluasi pada tiga tingkat yaitu presisi sistem, presisi metode, dan presisi intermediate.
Akurasi menyatakan tingkat kedekatan agreement antara nilai hasil pengukuran yang ditemukan dengan nilai referensi yang diterima sebagai nilai benar atau nilai sebenarnya dari analyte yang diuji.
6. Persyaratan Umum Pelaksanaan Validasi
Proses validasi maupun verifikasi metode analitik harus dilaksanakan setelah tahapan pengembangan metode analitik selesai dilakukan dan sebelum metode tersebut diterapkan dalam pengujian rutin sehari-hari. Waktu pelaksanaan yang tepat ini memastikan bahwa metode telah cukup matang secara teknis sebelum melalui proses validasi formal.
Validasi harus dilakukan sesuai dengan pedoman ICH yang berlaku. Setiap penyimpangan dari protokol validasi yang telah disepakati harus diberi justifikasi ilmiah yang memadai, ditelaah oleh personel yang berwenang, dan didokumentasikan secara lengkap sebagai bagian dari dokumentasi validasi.
Sebelum memulai proses validasi, tim laboratorium harus memverifikasi status kualifikasi dan kalibrasi instrumen yang akan digunakan untuk pelaksanaan studi validasi. Instrument yang belum melalui proses kualifikasi maupun kalibrasi yang sah tidak boleh digunakan untuk kegiatan validasi. Reagen dan bahan kimia yang digunakan harus memenuhi grade yang sesuai seperti AR grade atau HPLC grade. Standar referensi dan standar kerja yang digunakan harus dalam kondisi valid dengan masa berlaku sertifikat yang masih berlaku. Peralatan gelas yang digunakan harus merupakan peralatan gelas kelas A untuk memastikan akurasi pengukuran volume. Material yang bersifat tidak stabil atau berbahaya harus diidentifikasi dan kondisi penyimpanan yang sesuai harus didefinisikan dengan jelas.
Jika standar zat pengotor atau impurity standar tidak tersedia secara komersial, nilai Relative Response Factor (RRF) atau Relative Retention Time (RRT) dapat diperoleh dari sumber-sumber terpercaya seperti farmakope, Drug Master File (DMF), atau paket teknis dari produsen API.
Untuk metode kompendial, verifikasi biasanya mencakup assessment pada parameter spesifik meliputi spesifisitas, presisi, akurasi, stabilitas larutan, dan studi filter jika relevan dengan metode yang digunakan.
7. Pemilihan dan Preparasi Sampel serta Standar
Dalam pemilihan sampel untuk kegiatan validasi, untuk kekuatan yang sudah discaling atau sudah dalam bentuk sediaan jadi, validasi dilakukan menggunakan minimal tiga batch produk dengan tiga konsentrasi atau level yang berbeda. Pemilihan tiga batch dengan variasi konsentrasi bertujuan untuk memastikan bahwa metode dapat bekerja dengan baik pada berbagai kondisi konsentrasi yang mungkin dijumpai dalam pengujian rutin.
Untuk bahan obat atau drug substance, validasi dilakukan menggunakan tiga batch bahan obat dari sumber yang berbeda. Hal ini penting untuk memastikan bahwa metode analitik mampu bekerja dengan baik pada berbagai variasi sumber bahan obat yang mungkin digunakan dalam produksi.
Untuk zat pengotor atau impurities, baik pada produk obat jadi maupun bahan obat, studi validasi dilakukan menggunakan standar zat pengotor yang diketahui atau spiked samples. Penggunaan standar yang diketahui memungkinkan evaluasi yang lebih akurat terhadap kemampuan metode dalam mendeteksi dan mengkuantitasi zat pengotor.
Standar referensi harus berasal dari sumber yang terpercaya dan memiliki sertifikat analisis yang valid. Preparasi standar harus dilakukan dengan teknik aseptik dan sesuai dengan prosedur yang telah disetujui untuk memastikan konsistensi dan keandalan hasil.
8. Spesifisitas dan Selektivitas Metode
Spesifisitas metode analitik dievaluasi dengan melakukan pengujian terhadap blanko matriks, standar analyte murni, serta sampel yang mengandung zat pengotor atau degradan yang relevan. Evaluasi ini bertujuan untuk memastikan bahwa metode mampu membedakan sinyal analyte target dari sinyal yang dihasilkan oleh komponen lain dalam matriks sampel.
Untuk metode kromatografi, spesifisitas dinilai dari resolusi puncak analyte terhadap puncak zat pengotor atau degradan. Resolusi yang baik menunjukkan bahwa metode mampu memisahkan analyte target dari komponen lain dengan efektif.
Untuk metode spektrofotometri, spesifisitas dievaluasi dengan membandingkan spektrum absorpsi sampel dengan spektrum standar referensi. Tidak adanya interferensi pada panjang gelombang pengukuran menunjukkan bahwa metode memiliki spesifisitas yang cukup.
9. Batasan Deteksi dan Batasan Kuantitasi
Penentuan Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ) dapat dilakukan melalui beberapa pendekatan metodologis. Pendekatan pertama adalah berdasarkan pada standarisasi deviasi respons dan kurva kalibrasi. Pendekatan kedua adalah berdasarkan pada tingkat signal-to-noise ratio, di mana LOD ditetapkan pada rasio 3:1 dan LOQ ditetapkan pada rasio 10:1.
Untuk metode kromatografi, pendekatan signal-to-noise ratio merupakan metode yang umum digunakan karena memberikan dasar yang objektif dan dapat direproduksi. Penetapan LOD dan LOQ sangat penting terutama untuk metode pengujian zat pengotor dan produk degradasi, di mana konsentrasi analyte target sangat rendah.
10. Linearitas dan Jangkauan Kerja Metode
Linearitas dievaluasi dengan melakukan seri pengukuran pada minimal lima tingkat konsentrasi yang mencakup jangkauan yang diharapkan untuk metode tersebut. Data hasil pengukuran dianalisis menggunakan metode regresi linier untuk mendapatkan persamaan garis kalibrasi.
Koefisien korelasi (r) atau koefisien determinasi (R²) harus memenuhi kriteria penerimaan yang telah ditetapkan. Untuk metode kromatografi, nilai R² yang diterima umumnya lebih besar dari atau sama dengan 0,999. Slope dan intercept juga harus dievaluasi untuk memastikan tidak ada bias sistematis dalam metode.
Jangkauan metode ditetapkan berdasarkan pada interval konsentrasi di mana linearitas, akurasi, dan presisi telah terbukti memenuhi kriteria penerimaan. Pemilihan jangkauan harus didasarkan pada aplikasi metode dan konsentrasi analyte yang diharapkan dalam sampel rutin.
11. Presisi dan Reproduktibilitas
Presisi sistem dievaluasi dengan melakukan pengukuran berulang pada preparat standar yang sama menggunakan instrumen yang sama. Parameter ini memberikan gambaran tentang konsistensi instrumen dalam menghasilkan respons analitik.
Presisi metode atau presisi repetisi dievaluasi dengan melakukan analisis berulang pada sampel yang homogen oleh operator yang sama, menggunakan instrumen yang sama, dalam waktu yang berdekatan. Hasil dinyatakan dalam nilai Standard Deviation (SD) atau Relative Standard Deviation (RSD).
Presisi intermediate dievaluasi dengan melakukan analisis pada kondisi yang bervariasi seperti hari yang berbeda, operator yang berbeda, atau instrumen yang berbeda dalam laboratorium yang sama. Evaluasi ini memberikan gambaran tentang ketahanan metode terhadap variasi kondisi analisis sehari-hari.
12. Akurasi dan Ketepatan Metode
Akurasi dievaluasi melalui studi recovery dengan menambahkan analyte standar ke dalam matriks sampel pada berbagai tingkat konsentrasi. Persentase recovery yang diterima umumnya berada dalam range 98,0% sampai 102,0% untuk pengujian assay, tergantung pada jenis metode dan pedoman yang berlaku.
Perhitungan akurasi dilakukan dengan membandingkan nilai rata-rata hasil pengukuran dengan nilai referensi yang diharapkan. RSD dari hasil akurasi juga harus memenuhi kriteria penerimaan, biasanya kurang dari atau sama dengan 2,0% untuk pengujian assay.
13. Stabilitas Larutan dan Standarisasi
Studi stabilitas larutan dilakukan untuk menentukan masa simpan larutan standar dan larutan sampel dalam kondisi penyimpanan yang dinyatakan. Parameter yang dievaluasi meliputi potensi analyte, kemurnian, dan parameter lain yang relevan dengan metode analisis.
Larutan yang digunakan untuk validasi harus disimpan dalam kondisi yang ditetapkan sesuai dengan sifat kimia analyte, seperti suhu ruang, kulkas, atau freezer. Pengujian stabilitas dilakukan pada interval waktu yang ditentukan untuk memastikan bahwa larutan tetap stabil selama masa simpan yang dinyatakan.
14. Verifikasi Metode Kompendial
Verifikasi metode kompendial merupakan proses konfirmasi bahwa metode yang tercantum dalam farmakope resmi dapat perform dengan baik dalam kondisi laboratorium actual. Prosedur verifikasi mencakup assessment pada parameter-parameter kunci seperti spesifisitas, presisi, akurasi, stabilitas larutan, dan studi filter jika relevan.
Setiap parameter harus dinilai sesuai dengan kriteria penerimaan yang telah ditetapkan. Dokumentasi verifikasi harus mencakup semua data hasil pengujian, perhitungan, dan kesimpulan yang diperoleh. Hasil verifikasi harus direview dan disetujui oleh pihak yang berwenang sebelum metode dapat digunakan untuk pengujian rutin.
15. Validasi Metode Pengembangan Internal
Untuk metode analitik yang dikembangkan secara internal atau in-house, validasi lengkap harus dilakukan sesuai dengan semua parameter yang ditetapkan dalam pedoman ICH Q2(R1). Validasi lengkap mencakup assessment pada spesifisitas, linearitas, jangkauan, presisi, akurasi, batasan deteksi, batasan kuantitasi, dan stabilitas larutan.
Setiap parameter divalidasi secara terpisah dengan mengikuti protokol yang telah disepakati. Data hasil validasi dianalisis dan dibandingkan dengan kriteria penerimaan yang telah ditetapkan sebelum metode dinyatakan valid dan siap untuk digunakan dalam pengujian rutin.
16. Dokumentasi dan Pelaporan Hasil
Dokumentasi validasi metode analitik harus lengkap, jelas, mudah dibaca, dan dapat ditelusuri. Setiap langkah prosedur validasi, hasil pengamatan, perhitungan, dan kesimpulan harus didokumentasikan dengan rapi dalam format yang telah ditetapkan.
Laporan validasi harus mencakup informasi lengkap mengenai tujuan validasi, ruang lingkup, referensi pedoman yang digunakan, deskripsi metode analitik, parameter-parameter yang divalidasi, hasil dan analisis data, kriteria penerimaan, serta kesimpulan akhir. Setiap penyimpangan dari protokol harus dijelaskan bersama dengan justifikasi ilmiah yang memadai.
Dokumentasi validasi harus disimpan dengan aman dalam sistem arsip yang terkelola dengan baik dan dapat diakses untuk keperluan inspeksi atau audit oleh otoritas regulasi. Retensi dokumen harus sesuai dengan persyaratan yang berlaku, dan dokumen harus dilindungi dari perubahan atau kerusakan yang tidak sah.
17. Lampiran dan Referensi
Pedoman ICH Q2(R1) mengenai validasi metode analitik menjadi referensi utama dalam penyusunan dan pelaksanaan prosedur validasi ini. Selain itu, pedoman farmakope internasional seperti United States Pharmacopeia (USP) General Chapter <1225> mengenai validasi prosedur analitik dan USP <1226> mengenai verifikasi prosedur analitik kompendial juga menjadi referensi penting yang digunakan.
Perusahaan juga mengacu pada persyaratan regulasi nasional yang dikeluarkan oleh Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM) serta standar Good Manufacturing Practices (GMP) yang berlaku di Indonesia. Dokumentasi lengkap setiap studi validasi harus disimpan sebagai bagian dari arsip kualitas laboratorium dan tersedia untuk inspection readiness pada setiap saat.
Dengan melaksanakan validasi metode analitik secara komprehensif dan terdokumentasi dengan baik sesuai prosedur ini, Departemen Quality Control dapat memastikan bahwa data hasil pengujian yang dihasilkan bersifat andal, akurat, dan memenuhi persyaratan regulasi yang berlaku. Hal ini pada gilirannya akan berkontribusi secara signifikan terhadap jaminan kualitas produk farmasi yang diproduksi dan perlindungan keamanan pasien sebagai pengguna akhir produk obat.
