Sterilisasi biasanya dilakukan selama 15 menit pada suhu 121°C. Namun, jika suhu diturunkan menjadi 115°C, waktu sterilisasi harus diperpanjang untuk membunuh mikroorganisme dengan efektif. Disarankan untuk melakukan sterilisasi selama 30 menit pada suhu 115°C, atau bisa juga dihitung dengan nilai D. Misalnya, jika nilai D pada suhu 115°C adalah 3,75 dan kita ingin mengurangi 8 log, maka kita harus melakukan sterilisasi selama 3,75×8=30 menit.
Untuk memastikan proses sterilisasi efektif, kita harus melakukan validasi. Validasi untuk sterilisasi suhu rendah menggunakan spora Bacillus subtilis ATCC 5230. Strip dan ampul yang berisi spora ini disterilkan seperti biasa. Setiap strip mengandung sekitar satu juta spora.
Strip ini kemudian ditempatkan dalam media khusus dan diinkubasi pada 35°C selama satu minggu. Jika sterilisasi berhasil, tidak akan ada pertumbuhan spora yang terlihat. Pertumbuhan spora akan terlihat dari kekeruhan pada media. Jika media tetap jernih, berarti sterilisasi berhasil.
Untuk ampul yang berisi spora Bacillus subtilis, kita harus mengeluarkan media dari ampul untuk memeriksa pertumbuhan spora. Ampul ini juga diinkubasi pada suhu yang sama dan selama waktu yang sama, dan kita perlu memeriksa apakah ada perubahan warna pada ampul yang menandakan pertumbuhan spora.
