HPLC, yang dikenal sebagai Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, merupakan teknik analitis yang sangat penting dalam bidang farmasi dan kimia. Tujuan utama dari HPLC adalah untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan mengukur setiap komponen dalam campuran.
Metode ini melibatkan pelarut cair bertekanan yang dipompa melalui kolom yang diisi dengan zat penyerap padat. Setiap komponen dalam campuran memiliki interaksi yang berbeda dengan zat penyerap ini, yang menyebabkan mereka terpisah saat melalui kolom. Perbedaan laju aliran ini memungkinkan identifikasi dan kuantifikasi masing-masing komponen saat mereka elusi dari kolom.
Dalam industri farmasi, HPLC digunakan untuk menguji kualitas bahan baku dan produk jadi. Metodologi ini memastikan bahwa komponen yang digunakan dalam pembuatan obat-obatan memenuhi standar kualitas yang ditetapkan. HPLC juga digunakan untuk menentukan profil pengotor dan zat pengurai dalam obat, yang penting untuk menjamin keamanan dan efikasi produk farmasi
Sistem Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC) memainkan peran kunci dalam kontrol kualitas, memastikan bahwa obat yang dijual ke publik aman dan efektif. Dengan kemampuannya untuk melakukan analisis kualitatif dan kuantitatif, HPLC adalah alat yang tak ternilai dalam industri farmasi.
Sistem Kromatografi Kinerja Tinggi HPLC membantu lebih memahami, memperjelas dan menentukan jumlah pengotor dan zat pengurai dalam volume bahan obat dan formulasi.
Tips Analisis HPLC dalam Farmasi
- Pemilihan Kolom untuk Pengembangan Teknik HPLC: Pendekatan untuk memilih kolom yang tepat berbeda-beda. Pendekatan toolkit menawarkan pertimbangan kemungkinan pemisahan yang efektif dan luas untuk aplikasi yang diselidiki. Pemisahan dalam pembangunan didorong oleh selektivitas.
Terkait: Pengembangan Metode HPLC - Profil gradien, aditif, pengubah dan sifat fase diam merupakan bagian penting dari selektivitas. Karakteristik dan dukungan fase diam yang mendorong selektivitas harus dipertimbangkan.
- Teknik Penilaian Visual untuk Kinerja Kolom: Pertama, penting untuk mengetahui beberapa hal tentang hubungan penting dalam kromatografi ketika merancang percobaan. Anda harus mengambil kapasitas puncak untuk menghindari ledakan.
- Cara Memasang Detektor UV: Detektor UV sering digunakan dalam analisis HPLC, karena dianggap mudah digunakan dan menghasilkan data yang bermanfaat. Terkadang detektor UV diperlukan untuk melakukan tugas yang tidak biasa untuk mendapatkan garis dasar, sensitivitas, dan reproduksi yang lebih baik dari detektor.
- Jenis dan volume sel aliran akan mempengaruhi sensitivitas teknik dan efisiensi puncak. Mengatur lebar celah menjadi lebar sempit akan meningkatkan resolusi spektral, bandwidth, dan referensi. Penting untuk dicatat bahwa bandwidth yang lebar memiliki keunggulan dalam pengurangan kebisingan dengan menempatkan dioda dengan jangkauan yang lebih luas.
Terkait: Relative Response Factor (RRF) dan Perhitungannya dalam Analisis HPLC - Bagaimana Pengencer Sampel mempengaruhi HPLC: Pengencer sampel yang digunakan dalam pembuatan sampel HPLC dapat mempengaruhi bentuk puncak dan waktu retensi HPLC. Untuk menghilangkan efek kelebihan beban, volume sampel yang disuntikkan harus lebih rendah dari volume puncak sekitar 15%. Nilai puncak dan resolusi harus selalu diperhatikan untuk memastikan tidak ada efek yang terjadi.
- Pemilihan Buffer untuk Pemisahan HPLC: Buffer adalah larutan yang tahan terhadap perbedaan pH. Ini adalah larutan berair yang terdiri dari kesetimbangan campuran asam lemah dan basa kuat atau sebaliknya. Banyak faktor yang mempengaruhi pemilihan buffer; contohnya adalah pH yang diperlukan dari fase gerak atau volatilitas buffer. Jika buffer yang dipilih salah, maka perlu ditambahkan dengan konsentrasi yang lebih besar agar dapat bekerja dengan baik. Hal ini cenderung menimbulkan masalah yang berkaitan dengan ketahanan teknik.
- Peak Tailing dalam Analisis HPLC: Ini adalah salah satu distorsi bentuk puncak yang biasa terjadi dalam kromatografi. Jika asimetrinya lebih tinggi dari 1,2, maka disebut sebagai puncak. Alasan utama terjadinya peak tailing adalah karena terjadinya berbagai reaksi retensi analit. Untuk menghindari peak tailing, pastikan sistem bekerja pada pH yang lebih rendah yang akan mengurangi interaksi sekunder saat melakukan pemisahan dalam kromatografi.
Terkait: Prinsip HPLC - Cara Mengatasi Masalah Robustness di HPLC: Sangat penting untuk memeriksa profil gradien atau sistem data untuk mengetahui apakah gradien telah dimasukkan dengan benar. Setiap perubahan dalam volume tinggal gradien telah ditangani. Setelah dilakukan pengecekan, cari tahu komposisi eluennya, hal ini dapat dilakukan dengan membuat himpunan eluen yang baru. Jenis konsentrasi pengubah organik terkadang berpengaruh pada teknik selektivitas, sehingga dapat mengetahui pelarut organik yang tepat yang digunakan dalam proporsi saat ini.
- Pergeseran Waktu Retensi dalam HPLC: Fase gerak yang salah dipersiapkan untuk menghasilkan perubahan cepat dalam waktu retensi. Jadi, inilah beberapa tip tentang apa yang harus dilakukan dan tidak dilakukan.
Fase gerak isokratik tidak boleh disiapkan dalam gelas ukur, jangan menambahkan bahan organik ke dalam air untuk mendapatkan volume. Rasio pelarut yang salah akan diperoleh.
Pastikan buffer yang digunakan tepat dan juga pH yang benar.
Pastikan kalibrasi pH benar.
Untuk fase gerak yang sudah dicampur sebelumnya, jangan dipisahkan di bawah vakum
