Perawatan dan pemecahan masalah di sistem HPLC merupakan aktivitas penting di laboratorium kimia analitik mana pun. Sistem kromatografi cair telah menjadi alat bantu nyata dalam analisis kimia laboratorium, namun para ilmuwan telah mengembangkan hubungan cinta-benci dengan sistem ini. Berbagai macam aplikasi menyenangkan pengguna, sementara kompleksitas, ketahanan, dan kinerja yang berbeda-beda membuat mereka frustrasi. Tidak seperti peralatan laboratorium lainnya, sistem ini bukanlah solusi “plug and play”.
Perawatan dan pemecahan masalah sistem HPLC merupakan aktivitas penting di laboratorium kimia analitik mana pun.
Ada beberapa merek dan model, tetapi pengoperasian dasarnya serupa secara keseluruhan. Teknisi laboratorium memerlukan pelatihan dan pengalaman agar sistem LC dapat bekerja dengan baik. Artikel ini akan membahas dasar-dasar pemeliharaan dan pemecahan masalah sistem HPLC Anda.
Masalah Tekanan HPLC
Masalah utama dengan tekanan meliputi:
- Tekanan tidak normal yang umumnya berarti tidak ada aliran karena tidak ada listrik, terjadi ketika ada kebocoran atau udara terperangkap di kepala pompa, ada masalah dengan pengaturan pengontrol, atau piston rusak. Jika ada aliran dan tekanan, meteran atau transduser tekanan perlu diganti.
Botol hplc 2ml 9mm dengan autosampler - Tekanan balik yang tinggi biasanya disebabkan oleh laju aliran yang diatur terlalu tinggi. Bisa juga karena adanya penyumbatan pada frit kolom HPLC, kolom pelindung HPLC, injektor, atau filter in-line; penggunaan kolom HPLC yang salah atau fase gerak yang salah; suhu kolom rendah; atau kerusakan pengontrol.
Tekanan balik yang rendah umumnya disebabkan oleh laju aliran yang diatur terlalu rendah. Penggunaan kolom HPLC yang tidak tepat, pengaturan suhu kolom terlalu tinggi, kebocoran sistem, dan kegagalan fungsi pengontrol juga dapat menyebabkan tekanan balik yang rendah.
Perputaran tekanan dapat disebabkan oleh udara di dalam pompa, katup yang rusak, kebocoran sistem, kegagalan segel di pompa, degassing yang tidak mencukupi, atau penggunaan elusi gradien.
Masalah kebocoran HPLC
Kebocoran dapat terjadi dimana saja di dalam HPLC.
- Kebocoran pada fitting biasanya berarti fitting tersebut perlu dikencangkan, dibersihkan, atau diganti jika terlepas atau rusak. Masalah lainnya termasuk pengetatan fitting yang berlebihan atau penggunaan suku cadang dari produsen berbeda.
Kebocoran pada pompa bisa disebabkan oleh fitting yang kendor atau katup yang kendor sehingga harus dikencangkan. Mungkin juga ada kegagalan pada seal mixer, seal pompa, peredam pulsa, atau katup proporsional, sehingga bagian yang rusak perlu diperbaiki atau diganti.
Kebocoran dapat terjadi dimana saja di dalam HPLC - Kebocoran pada injektor bisa disebabkan karena penggunaan jarum suntik yang diameternya tidak tepat. Kegagalan segel rotor dapat menyebabkan kebocoran dan memerlukan perbaikan atau penggantian. Penyumbatan dapat terjadi pada loop atau saluran pembuangan sehingga memerlukan pembersihan atau penggantian. Jika segel port injektor kendor, maka harus dikencangkan. Kebocoran dapat terjadi karena adanya penyedotan saluran limbah, yang dapat diperbaiki dengan kemiringan yang tepat dan saluran pembuangan limbah tetap berada di atas permukaan.
Kebocoran pada kolom HPLC dapat disebabkan oleh fitting yang longgar sehingga perlu dikencangkan. - Kebocoran pada detektor dapat disebabkan oleh alat kelengkapan yang bocor dan perlu dikencangkan, kegagalan paking sel yang memerlukan perbaikan atau penggantian, jendela sel retak yang perlu diganti, atau penyumbatan saluran limbah atau sel aliran tersumbat yang memerlukan penggantian bagian-bagian tersebut.
Masalah Kromatografi HPLC
Kemungkinan Masalah yang dapat berasal dari Kolom HPLC
Puncak tailing disebabkan oleh penyumbatan frit, kekosongan kolom, interaksi sampel dengan situs aktif, puncak yang mengganggu, pH fase gerak yang salah, atau kolom yang perlu diganti.
Fronting puncak disebabkan oleh suhu rendah, penggunaan pelarut sampel yang salah, kelebihan beban sampel, atau kolom buruk yang perlu diganti.
Kemungkinan Masalah yang dapat berasal dari Kolom HPLC
Pisahkan puncak akibat kontaminasi pada saluran masuk kolom atau pada pelindung atau ketidakcocokan pelarut sampel dengan fase gerak.
Distorsi puncak yang besar karena kelebihan beban sampel.
Distorsi puncak kecil akibat penggunaan pelarut injeksi yang salah.
Tailing puncak awal karena masalah di luar kolom yang memerlukan sel detektor volume yang lebih kecil atau pemasangan ulang sistem.
Tailing yang meningkat seiring dengan meningkatnya k’ karena masalah dengan efek retensi sekunder.
Tailing puncak asam atau basa karena buffering yang tidak memadai.
Puncak ekstra karena adanya puncak hantu atau puncak elusi yang terlambat dari injeksi sebelumnya (carryover).
Waktu retensi melayang karena buruknya kontrol suhu atau keseimbangan kolom atau perubahan fasa gerak.
Waktu retensi berubah karena perubahan laju aliran, gelembung udara di pompa, atau fase gerak yang tidak tepat.
Penyimpangan garis dasar disebabkan oleh adanya kontaminan dalam fase gerak, fluktuasi suhu kolom, kesetimbangan kolom yang lambat, masalah dengan fase gerak, material yang tertahan kuat dalam sampel, atau detektor yang tidak dipasang dengan benar.
Kebisingan dasar karena kebocoran, udara terperangkap dalam sistem, kontaminasi, pencampuran fase gerak yang tidak sempurna, degassing fase gerak yang tidak memadai, masalah detektor, suhu
masalah pipa, denyut pompa, atau penggunaan peralatan elektronik lainnya pada saluran yang sama.
Puncak yang luas disebabkan oleh masalah pada fase gerak, kebocoran, kontaminasi pada kolom atau kolom pelindung, masalah suhu, konsentrasi buffer yang rendah, masalah dengan pengaturan detektor, konstanta waktu detektor yang tinggi, atau penghindaran pada saluran masuk kolom.
Hilangnya resolusi karena kontaminasi fase gerak, terhalangnya kolom analitis atau kolom pelindung, atau kolom yang perlu diganti.
Puncak yang terlalu kecil atau terlalu besar disebabkan oleh masalah redaman detektor, ukuran injeksi, atau sambungan perekam yang tidak tepat.
Mengatasi Masalah Masalah Injektor HPLC
Masalah dapat terjadi pada injektor manual dan injektor autosampler. Jika berbicara tentang injektor manual, masalahnya biasanya adalah terlalu sulit untuk diputar atau terlalu sulit untuk memuat. Jika terlalu sulit untuk diputar, segel rotor mungkin rusak, atau rotor mungkin terlalu kencang – ganti segel rotor. Jika terlalu sulit untuk memuatnya, mungkin terjadi ketidaksejajaran katup, penyumbatan pada loop atau saluran, atau alat suntik yang kotor.
Botol autosampler 2ml 9mm yang paling umum digunakan
Masalah paling umum pada injektor autosampler adalah injektor tidak dapat berputar, yang mungkin disebabkan oleh kurangnya daya atau tekanan, ketidaksejajaran katup, atau rotor yang terlalu kencang. Masalah lain dengan injektor autosampler termasuk penyumbatan, pengontrol yang rusak, atau mekanisme macet.
