Kegunaan Kolom Pelindung HPLC

Kegunaan dan Manfaat Kolom Pelindung HPLC

Dalam industri farmasi, analisis uji zat terkait sangat penting, terutama bila metode HPLC merupakan pendekatan gradien. Dalam analisis metode gradien, mendapatkan garis dasar mulus tanpa puncak tambahan biasanya merupakan suatu kesulitan. Dalam kasus tersebut, kolom Penjaga dapat digunakan untuk memberikan garis dasar yang halus dan mengecualikan puncak tambahan yang disebabkan oleh pengotor dalam pelarut yang digunakan untuk menyiapkan fase gerak dan pengencer.
“Jika metode sudah terverifikasi, data Ekivalensi metode diperlukan sebelum penggunaan normal kolom Penjaga.

Apa itu kolom penjaga?

Kolom pelindung adalah kolom atau cartridge yang ditempatkan di antara injektor dan kolom analitik untuk melindunginya. Ini mencegah kontaminan dan partikel tersuspensi memasuki kolom analitik. Biasanya panjangnya 2 cm dengan diameter bagian dalam 4,6 mm. Untuk menghasilkan kehilangan tekanan yang kecil, kolom pelindung diisi dengan partikel pelikular berukuran kira-kira 40 m.

Pengoperasian instrumen HPLC yang efisien didasarkan pada tidak adanya kontaminan kimia atau suspensi padat dalam fase gerak dan sampel. Tindakan pencegahan dan penanganan penggunaan fase gerak membahas tindakan pencegahan yang harus diambil selama persiapan dan penggunaan fase gerak. Pentingnya injeksi sampel yang telah dibersihkan (Centrifuge atau filter dengan filter jarum suntik) selalu bermanfaat.
Kolom HPLC merupakan komponen penting dari sistem HPLC yang memerlukan penanganan dan perlindungan yang hati-hati. Mengganti kolom secara terus-menerus membutuhkan biaya yang mahal sehingga tujuan Anda adalah memaksimalkan masa manfaat kolom sehingga setiap kali Anda mendapatkan akurasi dan konsistensi hasil yang diinginkan.
Kinerja kromatografi kolom HPLC menurun seiring waktu karena penumpukan kontaminan dan suspensi secara progresif. Partikel berukuran lebih besar dari 2μm yang ada dalam fase gerak atau sampel mulai mengendap pada frit masukan kolom, mengganggu homogenitas aliran. Partikel yang lebih kecil menghasilkan lebih banyak tekanan balik, menghalangi jalur aliran dalam fase diam.

Sifat Kontaminan

1. Dalam pemisahan fase terbalik, zat yang sangat tertahan seperti asam lemak. Zat yang tertahan secara permanen, seperti sisa protein, yang tidak dihilangkan seluruhnya setelah ekstraksi sampel.
2. Kotoran partikulat dapat disebabkan oleh non-filtrasi sampel atau keausan komponen sistem seperti segel pada pompa atau injektor.
3. Endapan kristal yang terbentuk akibat pengeringan sisa buffer di dalam kolom.
4. Setelah digunakan, kolom pencucian dengan air kelas HPLC atau larutan buffer menghambat perkembangan endapan garam.

• Gunakan kartrid pelindung untuk HPLC untuk meminimalkan kerusakan akibat bahan reaktif dan adsorpsi. Jika Anda pernah mengalami masalah dengan masa pakai kolom yang pendek, kartrid yang lebih panjang mungkin bisa membantu.
  Panjang 20 mm harus digunakan untuk sampel apa pun yang berpotensi mengandung komponen reaktif atau komponen yang sangat teradsorpsi.
• Pra-filter fase gerak jika mengandung garam penyangga atau pengubah apa pun yang berasal dari penimbangan bahan padat. Selain itu, pastikan Anda menggunakan pelarut dengan kualitas HPLC atau lebih baik.
  Jika menggunakan buffer dalam fase gerak Anda, jangan membuat perubahan drastis dari kandungan air tinggi ke rendah saat memompa kolom Anda. Jika tujuan Anda adalah beralih ke pelarut organik 100%, pastikan Anda membilas buffer terlebih dahulu menggunakan campuran yang mengandung minimal 50% air untuk minimal 7 volume kolom. Kegagalan untuk melakukan hal ini dapat mengakibatkan garam keluar dari larutan, menyumbat frit dan meningkatkan tekanan balik.
  Simpan kolom Anda dalam pelarut yang sesuai Saat menyimpan untuk jangka waktu yang lebih lama (lebih dari 2 hari), yang terbaik adalah selalu membaca petunjuk penanganan kolom untuk kolom tertentu. Kebanyakan kolom fase terbalik (termasuk C18, C18 berair, dan IBD) paling baik disimpan dalam campuran metanol atau asetonitril dan tidak lebih dari 50% air. Beberapa fase kami, seperti bifenil, Propil PFP, dan Amino lebih baik disimpan dalam asetonitril 100%. Hindari fase gerak yang tidak kompatibel, perhatikan bahan yang diketahui reaktif terhadap fase tertentu. Ini termasuk:

1. Aldehida dan keton dengan fase amino (termasuk aseton!)
2. Senyawa yang mengandung belerang dengan fasa propil PFP
3. Persentase yang signifikan dan/atau jumlah air yang tidak konsisten dengan silika telanjang
   . Periksa pH sampel Anda (dan fase gerak jika asam atau basa digunakan). Kebanyakan analis menggunakan pengukur pH. Jika Anda menggunakan pengukur, pastikan pengukur tersebut dikalibrasi dengan benar dan sering.

Jagalah kebersihan. Jika biasanya menjalankan gradien untuk fase balik LC, sesekali siram dengan fase gerak yang mengandung air sedikit lebih banyak daripada kondisi awal Anda dan tanpa garam penyangga, jangan melebihi 90% air untuk fase C18 tradisional. Demikian pula, pastikan Anda sesekali menyiram dengan fase gerak yang mengandung sedikit lebih banyak bahan organik daripada yang biasa Anda gunakan. Misalnya, jika gradien Anda naik hingga 90% organik, sesekali siram dengan 95% organik. Sekitar 7 volume kolom untuk masing-masingnya, dilakukan seminggu sekali atau lebih, sudah cukup untuk melakukan hal ini. (Anda mungkin akan melakukan beberapa hal ini sebelum penyimpanan, namun tidak ada salahnya untuk menyebutkannya!) Anda mungkin menemukan bahwa salah satu dari dua prosedur ini lebih bermanfaat daripada yang lain, tergantung pada apa yang ada dalam sampel Anda yang cenderung untuk menetap atau diserap. Anda dapat mengubah pemeliharaan sesuai kebutuhan sesuai dengan ini. Anda dapat mempertimbangkan untuk memprogram siklus pembilasan (dengan gradien yang menjaga konsentrasi pada titik tertinggi dan terendah) di penghujung hari atau secara berkala jika dirasa membantu.

Fitur Kolom Penjaga yang Diinginkan

1. Untuk menghindari masalah pemisahan, kolom Penjaga idealnya memiliki kemasan yang sama dengan kolom analitik. 2. Untuk mengurangi tekanan balik, ID internal kolom pelindung harus sebanding dengan ID kolom analitik. Sebaiknya panjang kolom pelindung lebih pendek, namun harus cukup panjang untuk mencegah senyawa yang terikat tinggi mencapai kolom utama.
2. Frit yang menghadap injektor harus dapat dilepas untuk dibersihkan, dengan material sekitar 2 mm dikeluarkan dan diganti dengan material baru.
3. Jika dibandingkan dengan mengisi ulang kolom pelindung, kolom pelindung kartrid sekali pakai lebih nyaman dan hemat biaya.
   Kolom penjaga perlu diubah secara teratur tetapi perubahan perantara diperlukan melalui pengamatan perubahan perilaku kromatografi seperti peningkatan tekanan balik, pelebaran puncak, dan perubahan waktu retensi puncak. Namun, frekuensi perubahan dapat ditentukan berdasarkan komposisi kimia sampel, keberadaan komponen yang sangat tertahan atau tertahan secara ireversibel, volume injeksi, atau jumlah injeksi.
   Apa perbedaan antara Kolom Pelindung HPLC dan Kartrid Pelindung?
   Kolom pelindung HPLC dan kartrid melindungi kolom HPLC analitis, semi-preparatif, dan preparatif. Mereka berkontribusi pada kehidupan kolom dengan menghilangkan polutan partikel dan bahan kimia yang sangat mudah menyerap dari sampel.
   Kolom penjaga idealnya memiliki fase diam yang sama dengan kolom analitik. Untuk menghindari tekanan balik, ID internal kolom penjaga harus sebanding dengan ID kolom utama. Lebih kecil biasanya lebih baik, namun harus cukup besar agar berhasil mencegah bahan kimia yang mengandung banyak dampak negatif terhadap kolom utama. Kolom pelindung tipe kartrid juga merupakan alternatif sederhana dan berbiaya rendah dibandingkan kolom pelindung yang dapat diisi ulang.
   Desain Perangkat Keras Kolom Pelindung vs. Desain Perangkat Keras Kartrid Pelindung
   Kolom Penjaga
   Kolom penjaga persis seperti namanya: kolom kecil. Ini mirip dengan kolom HPLC, hanya saja kolom ini jauh lebih pendek dan berisi partikel resin yang lebih besar. Ukuran partikel resin yang lebih besar menangkap partikel dalam sampel dan fase gerak tanpa mengganggu kromatografi atau menyebabkan tekanan balik yang signifikan dalam sistem. Casing kolom pelindung terbuat dari baja tahan karat 316.