Daftar Isi
HPLC
HPLC (high performance liquid chromatography) dan UHPLC (ultra-high performance liquid chromatography) adalah dua teknik analisis yang sering digunakan dalam pemisahan molekul. Kedua teknik ini memiliki prinsip kerja yang sama, yaitu menggunakan kolom yang berisi fase diam dan fase gerak untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan mengukur konsentrasi berbagai senyawa dalam sampel.
Namun, ada beberapa perbedaan mendasar antara HPLC dan UHPLC yang perlu Anda ketahui sebelum memilih salah satu teknik ini untuk aplikasi Anda. Perbedaan-perbedaan ini berkaitan dengan ukuran partikel, dimensi kolom, laju alir, tekanan balik, dan parameter deteksi.
Perbedaan HPLC vs UHPLC
Berikut adalah tabel yang membandingkan HPLC dan UHPLC berdasarkan aspek-aspek tersebut:
| Aspek | HPLC | UHPLC |
|---|---|---|
| Ukuran Partikel | 3-5 µm | 2 µm atau lebih kecil |
| Dimensi Kolom | 4,6 mm x 250 mm | 2,1 mm atau kurang x 100 mm |
| Laju Alir | 1-2 mL/menit | 0,2-0,7 mL/menit |
| Tekanan Balik | 400-600 bar | 1500 bar atau lebih |
| Parameter Deteksi | 250 Hz atau kurang | 250 Hz atau lebih |
Dari tabel di atas, Anda dapat melihat bahwa UHPLC menggunakan partikel dan kolom yang lebih kecil, laju alir yang lebih rendah, dan tekanan balik yang lebih tinggi daripada HPLC. Hal ini memungkinkan UHPLC untuk memberikan resolusi, kecepatan, dan sensitivitas yang lebih tinggi daripada HPLC. Dengan kata lain, UHPLC dapat memisahkan lebih banyak puncak dalam waktu yang lebih singkat dan dengan kuantitas sampel yang lebih sedikit.
Namun, UHPLC juga memiliki beberapa kelemahan dibandingkan HPLC. Pertama, UHPLC membutuhkan sistem yang lebih kuat dan tahan tekanan tinggi, yang berarti biaya investasi dan operasional yang lebih tinggi. Kedua, UHPLC membutuhkan pelarut dan sampel yang lebih murni, yang berarti proses persiapan yang lebih rumit dan mahal. Ketiga, UHPLC membutuhkan detektor yang lebih responsif dan akurat, yang berarti kualitas data yang lebih baik tetapi juga lebih rentan terhadap gangguan.
Oleh karena itu, Anda tidak dapat sembarangan memilih antara HPLC dan UHPLC tanpa mempertimbangkan tujuan dan kebutuhan analisis Anda. Anda harus menentukan faktor-faktor seperti kompleksitas sampel, analit yang harus diukur, throughput yang diinginkan, sensitivitas yang dibutuhkan, dan anggaran yang tersedia. Anda juga harus mempertimbangkan kemudahan transfer metode, validasi, dan standarisasi antara HPLC dan UHPLC.
Secara umum, HPLC lebih cocok untuk analisis rutin yang tidak membutuhkan resolusi dan kecepatan yang tinggi, tetapi lebih mengutamakan ekonomi dan keandalan. UHPLC lebih cocok untuk penelitian dan pengembangan metode yang membutuhkan resolusi dan kecepatan yang tinggi, tetapi juga membutuhkan kualitas dan presisi yang tinggi.
Sumber:
1 HPLC vs UHPLC: Pilih yang Mana? – Wiralab
2 HPLC vs UHPLC – Learn the difference | HPLC vs UPLC – Shimadzu
3 Analisis Perbandingan HPLC dan Teknik Lain untuk Deteksi Antibiotik
4 Apa Perbedaan Antara HPLC dan UPLC? – strephonsays
5 Perbedaan Antara HPLC dan UPLC (Sains & Alam)
