Kolom HPLC yang digunakan secara berkelanjutan dengan tekanan tinggi bisa merusak dan membebani peralatan. Karena itu, sangat penting untuk mengawasi tekanan balik kolom dan mengatasi masalah secepat mungkin. Tekanan balik yang meningkat bisa terjadi karena kolom atau peralatan yang tersumbat.
Apa penyebab tekanan rendah pada HPLC?
Salah satu penyebab utama dari tekanan yang hilang/rendah adalah saluran masuk pelarut yang tidak tercelup dalam pelarut, reservoir yang kosong, atau kebocoran. Salah satu penyebab utama dari tekanan yang berfluktuasi adalah pipa yang memiliki lapisan dasar yang jelek dan pelarut yang tidak terdegaasasi dengan baik. Penyimpangan dasar bisa bersifat acak atau berulang.
Apa penyebab tekanan tinggi pada HPLC?
Tekanan balik yang tinggi pada alat LC biasanya disebabkan oleh benda asing yang menghambat aliran fase gerak. Walaupun pipa PEEK atau stainless steel yang bengkok kadang-kadang jadi penyebabnya, partikel yang menyumbat sistem lebih sering jadi penyebabnya.
Apa itu tekanan balik di HPLC?
Tekanan balik adalah tekanan yang ditimbulkan oleh kolom/garis dan bergantung pada viskositas cairan, laju aliran, suhu, dll. Tekanan balik tidak dikontrol secara langsung oleh pengaturan pompa, karena tekanan adalah akibat dari pengaturan pompa yang sesuai dengan hambatan sistem terhadap aliran.
Bagaimana cara menangani tekanan balik di HPLC?
Peningkatan tekanan balik biasanya menunjukkan adanya masalah pada kolom pelindung atau kolom analitis. Untuk mengetahui secara pasti di mana letak masalahnya Disarankan agar melepas kolom pelindung (jika Anda menggunakannya) dan mengganti kartrid lama dengan yang baru. Jika tekanan awal pulih, Anda memecahkan masalah.
Masalah Tekanan Sistem
- Untuk mengidentifikasi perubahan tekanan dari operasi normal, buatlah titik referensi tekanan.
- Tekanan Sistem dipengaruhi oleh kolom, fase gerak, laju aliran, suhu dan dapat sangat bervariasi menurut metode yang berbeda. Laju aliran/pulsasi tekanan tidak menentu
- Tekanan berlebih
Tidak ada atau tekanan rendah
Laju aliran/denyut tekanan yang tidak menentu
- Udara dalam sistem: Jalankan pompa (metanol atau IPA untuk menghilangkan udara)
- Udara dalam saluran pelarut. Pelarut dalam botol tidak mencukupi: Ganti botol pelarut
- Udara dalam garis pelarut. Filter botol kotor: Lepaskan filter botol
- Udara dalam garis pelarut. Degas tidak cukup: Degas fase gerak
- Masalah dengan katup periksa: Sonikasikan atau ganti katup periksa
- Masalah dengan seal atau penyedot: Ganti seal atau penyedot
Tekanan berlebih
- Periksa apakah tekanan meningkat secara bertahap atau tiba-tiba: Jika tekanan meningkat secara bertahap, partikulat terakumulasi dalam filter inline, kolom frit, atau kolom. Jika tekanan meningkat secara tiba-tiba, mungkin ada sesuatu yang menghalangi sistem atau kolom.
- Periksa apakah ada yang berubah (kolom, fase gerak, suhu)
- Jika tidak ada yang berubah, lepaskan kolom dan ganti dengan penyatuan untuk memeriksa apakah tekanan sistem normal.
- Jika tekanan sistem tinggi, kendurkan alat kelengkapan mulai dari sambungan terakhir dan berjalan mundur ke pompa
- Setelah melonggarkan setiap fitting, amati apakah tekanannya tetap sama atau berkurang. Ganti atau bersihkan bagian yang sesuai
- Perhatian: Jangan mengendurkan alat kelengkapan di bawah tekanan tinggi
Tekanan rendah
Periksa apakah ada yang berubah (kolom, fase gerak, suhu, metode)
Jika tidak ada yang berubah, periksa kebocorannya.
Tidak ada tekanan
- Udara dalam sistem: Jalankan pompa (metanol atau IPA untuk menghilangkan udara)
- Udara dalam saluran pelarut. Pelarut dalam botol tidak mencukupi: Ganti botol pelarut
- Masalah dengan katup periksa: Sonikasikan atau ganti katup periksa
- Masalah dengan seal atau penyedot: Ganti seal atau penyedot
