Berapa umur simpan kolom HPLC yang digunakan? ini sering menjadi pertanyaan bagi personil yang ada di laboratorium?
Kebanyakan kolom HPLC terbuat dari baja tahan karat, pemisahan sebenarnya terjadi pada kolom biasanya panjang kolom 30 hingga 250 mm, diameter 01 hingga 05 mm, dan ukuran pori 03, 05, dan 10 mikron. Kolom dikemas dengan partikel berpori. Partikel berpori terbuat dari polimer dan dikelilingi oleh lapisan tipis silika dan polistiren.
Pada tahun-tahun awal, LC dilakukan dalam kolom kaca dengan diameter 01 sampai 05 cm dan panjang 50 sampai 500 cm. Umumnya HPLC memiliki kolom pelindung di depan kolom analitik untuk melindungi dari kontaminan dan menghilangkan material partikulat sehingga membantu memperpanjang umur kolom analitik, kolom pelindung dan kolom analitik memiliki fase diam yang sama.
Sejauh yang saya tahu, mungkin tidak ada tanggal “terbaik sebelum”. Jika Anda menyimpannya dalam pelarut yang sesuai dan mengawetkannya dalam kondisi yang tepat, menurut saya produk tersebut mungkin masih berfungsi, namun, kinerjanya mungkin tidak persis seperti sebelumnya. namun, Anda harus mengujinya.
Kedaluwarsa dan umur simpan Kolom HPLC
Apa yang biasanya saya dukung adalah membuat kromatogram dari apa yang Anda asumsikan dengan keseluruhan metode dan jika Anda ingin menggunakannya lagi dalam satu atau 2 tahun, kembalilah ke kondisi tersebut dan metode sebenarnya dan cobalah dan lihat di kromatogram sekarang vs sebelumnya. itu akan memberi tahu Anda seberapa sesuai kolom tersebut.
Tentu saja, 2 tahun adalah waktu yang sangat lama untuk memiliki sebuah kolom di rak, jadi saya tidak akan terlalu terkejut jika kinerjanya setidaknya turun sedikit. Jika Anda ingin penurunan kinerja paling sedikit, saya sarankan untuk membersihkannya dengan baik. Kemudian masukkan ke dalam pelarut yang sesuai. Simpan di tempat yang terhindar dari getaran, suhu ekstrem, atau kelembapan.
Untuk memastikan kualitas produk, kolom idealnya disimpan pada kondisi sekitar (kecuali ditentukan lain dalam petunjuk perawatan dan penggunaan) dengan kontrol yang memadai untuk mencegah pemalsuan dan kontaminasi. Dalam kondisi ini, masa pakai kolom dapat diperpanjang. Namun, karena keragaman aplikasi yang dapat dikaitkan dengan kolom, maka merupakan kebijakan produsen kolom untuk menyerahkan tugas tanggal kedaluwarsa kolom kepada pelanggan. Oleh karena itu, sangat disarankan agar masa berlaku kolom ditentukan oleh pelanggan berdasarkan permohonan individualnya.
Membiarkan perpindahan kolom favorit mungkin sulit dilakukan, jadi kapankah waktu yang tepat untuk mengucapkan selamat tinggal? Di bawah ini adalah beberapa tanda yang harus diperhatikan bahwa masa pacaran dan kolom HPLC Anda akan segera berakhir.
- Tekanan Balik Tinggi tidak dikurangi dengan pembilasan kolom secara terbalik
- Pisahkan Puncak
- Hilangnya Resolusi
- Bentuk Puncak Luas
- Pergeseran Waktu Retensi
Tekanan Balik Tinggi
Peningkatan tekanan balik biasanya disebabkan oleh penyumbatan pada saluran masuk kolom HPLC. Untuk menghilangkan penyumbatan di sebagian besar situasi, Anda dapat membalikkan aliran pelarut melalui kolom dengan laju aliran yang lebih rendah dan mengalirkan pelarut kuat 100% melalui kolom untuk menghilangkannya. Jika tekanan Anda tidak kembali normal, mungkin frit tersumbat secara permanen atau ada kekosongan di kolom Anda. Kedua situasi tersebut memerlukan penggantian kolom.
Pisahkan Puncak
Banyaknya puncak terbelah juga merupakan hasil dari penyumbatan frit pada saluran masuk kolom yang menghasilkan injeksi yang tersalurkan. Untuk mengatasinya ikuti langkah-langkah yang diuraikan di atas terlebih dahulu dan terutama. Jika puncak terbelah tetap ada, kemungkinan penyebabnya adalah kondisi pengoperasian metode yang salah (bekerja terlalu dekat dengan pKa senyawa atau menggunakan pelarut Injeksi yang kuat) atau kolom Anda mungkin kotor karena kontaminan yang sangat tertahan. Jika Saluran Masuk tersumbat secara permanen atau fase diam kotor karena kontaminan, Anda perlu mengganti kolom.
Sebelum dibilas
Setelah dibilas
Hilangnya Resolusi
Kolom HPLC adalah item yang dapat dikonsumsi dan dengan demikian seiring waktu Anda akan mulai kehilangan resolusi pasangan kritis Anda. Beberapa regenerasi kolom mungkin dapat dilakukan dan masing-masing kolom akan mempunyai protokol tersendiri untuk hal ini, namun, setelah hilangnya resolusi pasangan senyawa kritis telah tercapai dan tidak dapat dibuat ulang, kolom Anda telah mencapai akhir masa pakai alaminya. analisis tertentu yang Anda lakukan.
Puncak Luas
Beberapa pelebaran puncak dapat terjadi karena alasan lain selain karena berakhirnya umur kolom secara alami, hal ini termasuk 1. Kelebihan beban injeksi
- Buffer tidak memadai
- Kondisi metode yang tidak sesuai
- Pelarut injeksi yang kuat.
Namun, jika elemen-elemen ini telah dihilangkan, pelebaran puncak adalah salah satu tanda penuaan kolom Anda. Setelah bentuk puncak Anda memburuk hingga Anda tidak dapat lagi melewati kesesuaian sistem atau menyelesaikan pasangan kritis, inilah saatnya untuk berpisah.
Pergeseran Waktu Retensi
Pergeseran waktu retensi seringkali disebabkan oleh kontrol metode yang buruk, namun, dalam kasus kontaminasi fase, Anda akan melihat penyimpangan waktu retensi mencapai puncaknya jika fase Anda menjadi kotor. Tidak semua puncak akan terkena dampak yang sama dan jika Anda telah menghilangkan semua masalah metode dari pemecahan masalah Anda, kemungkinan penyebabnya adalah kontaminasi fase diam dan kolom Anda harus dimatikan.
Berapa umur kolom HPLC jika disimpan dengan endcaps?
Kolom HPLC dapat bertahan dalam jangka waktu yang lama dan tidak memiliki umur simpan yang pasti, namun hal ini bergantung pada pelarut penyimpanan apa yang digunakan untuk penyimpanan kolom. Jika kolom dibilas dengan benar setelah digunakan dan disimpan dalam 100% pelarut organik seperti asetonitril, kolom akan bertahan selama bertahun-tahun.
Praktik terbaiknya adalah menggunakan pelarut pengiriman kolom seperti yang direkomendasikan oleh produsen kolom. Jika kolom tidak dibilas dan disimpan dalam kondisi buffer, misalnya, umur kolom akan berkurang secara signifikan karena pengendapan garam buffer. Sejarah kolom dapat mempengaruhi umur kolom tersebut. Ini menyarankan untuk menjalankan tes QC seperti yang dijelaskan dalam informasi yang disertakan dengan kolom.
