Sebelum kita melihat bagaimana teknik degassing bisa membantu, penting untuk mengerti proses terjadinya masalah ini. Dengan menghilangkan gas terlarut, kita bisa mengurangi risiko masalah yang disebabkan oleh gelembung udara.
Pelepasan gas dapat terjadi pada pencampuran atau dimana saja dalam sistem HPLC dimana permukaan kasar menghasilkan tempat nukleasi untuk pembentukan gelembung. Secara praktis tidak perlu menghilangkan seluruh udara terlarut tetapi hanya sebagian kecil yang dapat dihilangkan untuk menurunkan tingkat lewat jenuh dalam fase gerak.
Sistem pencampuran bertekanan rendah lebih rentan terhadap pembentukan gelembung. Dalam pencampuran tekanan rendah, pelarut dicampur pada tekanan atmosfer dan pelepasan gas dapat terjadi di mana saja di sepanjang jalur aliran.
Sebaliknya pada pelarut bertekanan tinggi pencampuran dicampur setelah melewati pompa dan pencampuran berlangsung di bawah tekanan tinggi dalam ruang pencampuran.
Campurannya mungkin jenuh tetapi pelepasan gas pada tekanan tinggi dapat dicegah. Pembentukan gelembung, jika ada, dapat terjadi ketika fase gerak keluar dari kolom dan kembali ke tekanan atmosfer.
Teknik Degassing Fase gerak
Praktik degassing yang umum digunakan untuk fase gerak HPLC adalah:
- Pembersihan helium
- Degassing vakum
- Sonikasi
Pendidihan fase gerak adalah teknik yang paling efektif untuk menghilangkan udara terlarut sepenuhnya tetapi tidak pernah disarankan karena hilangnya komponen-komponen yang mudah menguap bersama dengan gas-gas dan juga memerlukan waktu yang lama untuk menyeimbangkan fase gerak ke kondisi suhu lingkungan yang diperlukan.
Pembersihan Helium menghilangkan hingga 80% udara terlarut. Untuk fase gerak organik – berair, volume helium yang sama untuk pembersihan sudah cukup. Laju pasokan helium dapat dikurangi seiring waktu karena pembersihan yang berlebihan dapat menyebabkan hilangnya komponen fase gerak yang lebih mudah menguap.
Vacuum Degassing menghilangkan lebih dari 60% udara terlarut. Salah satu pilihannya adalah menerapkan vakum selama filtrasi fase gerak melalui filter membran porositas 0,45 atau 0,22μm.
Degassing vakum online tersedia di sebagian besar sistem komersial yang tersedia. Fase gerak dilewatkan melalui pipa polimer berpori yang ditempatkan dalam ruang vakum di dalam HPLC. Porositas pipa memungkinkan keluarnya gas melalui dinding tetapi cairan tetap tertahan di dalam pipa.
Sonikasi menggunakan rendaman ultrasonik umum dilakukan di sebagian besar laboratorium tetapi sebagai teknik yang berdiri sendiri, sonikasi hanya menghilangkan hingga 30% udara terlarut sehingga sonikasi yang dikombinasikan dengan teknik lain direkomendasikan.
Untuk tujuan praktis disarankan untuk menghilangkan gas fase gerak dalam sistem pencampuran tekanan rendah dan tinggi dan kombinasi teknik yang berbeda dapat menghilangkan sebagian besar masalah yang terkait dengan pembentukan gelembung.
Karena degassing vakum online ditawarkan pada sebagian besar sistem yang tersedia secara komersial, sonikasi yang dikombinasikan dengan degassing online memberikan hasil yang memuaskan.
